1.綠葉中色素的提取和分離的實驗報告
的要求:
1、進行綠葉中色素的提取和分離。
2.、探究綠葉中含有幾種色素。
課時數:一課時
實驗儀器和材料:
一定量的新鮮菠菜葉,干燥的定性濾紙,試管,棉塞,試管架,研缽,玻璃漏斗,尼龍布,毛細吸管,剪刀,藥勺,量筒(10ml),天平,鉛筆,無水乙醇,層析液(由20份石油醚、2份丙酮和1份苯混合而成。93號汽油也可代用),二氧化硅和碳酸鈣。
準備工作:
1、提前購買并洗凈一定深綠色的菠菜葉。
2、將實驗儀器按照學生組數分好。
3、準備實驗報告,將實驗中的重難點以問題的形式備好課,在實驗過程中引導學生理清知識。
4、充分考慮安全問題,并做好防范措施。
實驗步驟:
1、提取綠葉中的色素。
2、制備濾紙條:將干燥的濾紙條的一端剪去兩角,放入試管下端,并在距這一端1 cm處用鉛筆畫一條細的橫線。
3、畫濾液細線:用毛細吸管吸取少量濾液,沿鉛筆線均勻畫一條細而直的濾液線,待干燥后再重復畫2~3次,以增加色素量。
4、色素的分離:將于燥后的濾紙條畫線一端朝下放入有少許(2~3ml)層析液的層析瓶(燒杯)中,蓋上蓋(培養皿)。
5.觀察記錄結果:層析后,取出濾紙條,觀察色素分離情況,看
色素帶條數,寬窄,及其之間的距離,做好記錄,小組之間進行交流,分析成敗原因。
實驗結束時根據學生的實驗結果,教師要作出相應的評析,對于實驗中的重難點做出強調
2.葉綠體色素提取,分離及理化性質的鑒定實驗報告
實驗三 葉綠體色素的提取分離與理化性質鑒定
一、實驗目的
1、學會葉綠體色素提取和分離的方法。
2、了解葉綠體色素的熒光現象、皂化反應等理化性質。
二、實驗原理
葉綠體中含有綠色素(包括葉綠素a和葉綠素b)和黃色素(包括胡蘿卜素和葉黃素)兩大類,這兩類色素都不溶于水,而溶于有機溶劑,故可用乙醇或丙酮等有機溶劑提取。
提取液可用色層分析的原理加以分離。因吸附劑對不同物質的吸附力不同,當用適當的溶劑推動時,混合物中各成分在兩相(流動相和固定相)間具有不同的分配系數,所以它們的移動速度不同,經過一定時間層析后,便將混合色素分離。
葉綠素是一種二羧酸——葉綠酸與甲醇和葉綠醇形成的復雜酯,故可與堿起皂化反應而生成醇(甲醇和葉綠醇)和葉綠酸的鹽,產生的鹽能溶于水中,可用此法將葉綠素與類胡蘿卜素分開;葉綠素與類胡蘿卜素都具有光學活性,葉綠素吸收光量子而轉變成激發態,激發態的葉綠素分子很不穩定,當它變回到基態時可發射出紅光量子,因而產生熒光。葉綠素中的鎂可以被H+所取代而成褐色的去鎂葉綠素,后者遇銅則成為綠色的銅代葉綠素,銅代葉綠素很穩定,在光下不易破壞,故常用此法制作綠色多汁植物的浸漬標本。
三、實驗器材
新鮮的植物葉片。
研缽;漏斗;100ml三角瓶;玻璃棒;剪刀;滴管;培養皿;定性濾紙條(5cm*1.5cm)。
毛細管;試管;試管架;石棉網;燒杯(100ml);酒精燈;鐵三角架;刻度吸量管2ml、5ml各1支。
四、實驗試劑
1、95%乙醇;石英砂;碳酸鈣粉
2、推動劑:按石油醚:丙酮:苯(10:2:1)比例配制(體積比)
3、醋酸銅粉末;5%的稀鹽酸
4、甲醇、KOH
五、實驗步驟
1.葉綠體色素的提取
(1)取菠菜或其他植物新鮮葉片4~5片(2g左右),洗凈,擦干,去掉中脈,剪碎,放入研缽中。
(2)研缽中加入少量石英砂及碳酸鈣粉,加2~3ml 95%乙醇,研磨至糊狀,再加10ml 95%乙醇,暗處放置3~5min,上清液過濾于三角瓶中,殘渣用10ml 95%乙醇沖洗,一同過濾于三角瓶中。
2. 葉綠體色素的分離
(1)取一塊預先干燥處理過的定性濾紙,將它剪成長約10cm ,寬約1cm的濾紙條。
(2)用毛細管吸取色素提取液。在濾紙條的一端(約距這一端的1cm處)劃出一條濾液細線,等濾液干燥后,再重復劃4~5次。
(3)將濾紙條的另一端(約距這一端1cm處)折成“V”字形,并將它掛在放有層析液的燒杯壁上(注意:色素線要略高于層析液面,且濾紙條下端最好不要碰到燒杯壁),蓋上培養皿。
3.葉綠體色素的性質鑒定
(1)熒光現象的觀察
取1支20ml刻度試管加入5ml葉綠體色素乙醇提取液,在直射光下觀察溶液的透射光與反射光顏色有何不同?解釋原因。
(2)皂化作用(綠色素與黃色素的分離)
在做過熒光現象觀察的葉綠體色素乙醇提取液試管中加入1.5ml 20%KOH-甲醇溶液,充分搖勻。片刻后,加入5ml苯,搖勻,再沿試管壁慢慢加入1~1.5ml蒸餾水,輕輕混勻(勿激烈搖蕩),于試管架上靜置分層。若溶液不分層,則用滴管吸取蒸餾水,沿管壁滴加,邊滴加邊搖動,直到溶液開始分層時,靜置。可以看到溶液逐漸分為兩層,下層是稀的乙醇溶液,其中溶有皂化的葉綠素a和b(以及少量的葉黃素);上層是苯溶液,其中溶有黃色的胡蘿卜素和葉黃素。
(3)H+和Cu++對葉綠素分子中Mg++的取代作用
取上述色素乙醇提取液少許于試管中,加入5%HCl數滴,搖勻,直至溶液出現褐綠色,當溶液變褐后,再加入少量醋酸銅粉末,微微加熱,觀察記載溶液顏色變化情況。
六、注意事項
1、為了避免葉綠素的光分解,操作應在弱光下進行。
2、研磨時間盡可能短些,以不超過兩分鐘為宜。
3、在低溫下發生皂化反應的葉綠體色素溶液,易乳化而出現白絮狀物,溶液渾濁,且不分層。可激烈搖勻,放在30~40℃的水浴中加熱,溶液很快分層,絮狀物消失,溶液變得清澈透明。
七、實驗報告
1、將紙層析法分離葉綠體色素的實驗結果貼在實驗報告紙上,并給予分析。
《你看著少抄點》
3.綠葉中色素的提取和分離的實驗報告.是照你的答案直接抄下去呢還是只
活動目標 1.進行綠葉中色素的提取和分離的實驗。
2.探究綠葉中含有幾種色素。實驗原理 光合色素易溶于無水乙醇等有機溶劑中,可以用無水乙醇提取綠葉中的光合色素。
光合色素可溶于層析液中,不同的光合色素在層析液中的溶解度不同。溶解度高的光合色素隨層析液在濾紙上擴散得快;溶解度低的光合色素在濾紙上擴散得慢。
這樣,最終不同的光合色素會在擴散過程中分離開來。操作指南 1.材料 新鮮的綠色葉片(如菠菜葉,南方學校也可嘗試用朱槿葉)2.用具 定性濾紙,棉塞,試管,試管架,研缽,玻璃漏斗,尼龍布,毛細吸管,剪刀,藥勺,天平,10 mL量筒。
3.試劑及其他藥品 無水乙醇,層析液,二氧化硅,碳酸鈣。4.操作要點 (1)提取光合色素 用天平稱取5 g綠色葉片,剪碎,放入研缽中。
向研缽中放入少量二氧化硅和碳酸鈣,加入10 mL無水乙醇,迅速、充分地研磨。在玻璃漏斗基部放一塊單層尼龍布,將漏斗插入試管。
將研磨液倒入漏斗,及時用棉塞塞嚴盛有濾液的試管。(2)制備濾紙條 將干燥的定性濾紙剪成長與寬略小于試管長與寬的濾紙條,將濾紙條一端剪去兩角,在此端距頂端1 cm處用鉛筆畫一條細橫線。
(3)畫濾液細線 用毛細吸管吸取少量濾液,沿鉛筆線均勻畫細線。待濾液線干后,重復畫線一兩次。
(4)分離光合色素 將適量的層析液倒入試管,將濾紙條畫線一端朝下,輕輕插入層析液中,迅速塞緊試管口。(注意:不要讓層析液觸及濾液線。)
(5)觀察、記錄 待層析液上緣擴散至接近濾紙條頂端時,將濾紙條取出,風干。觀察濾紙條上所出現的色素帶及其顏色,并做好記錄。
5.需要注意的幾個問題 (1)應選擇綠色較深、光合色素含量較高的植物葉片,如菠菜葉、朱槿葉等,作為實驗材料,以便使濾液中色素濃度較高。(2)畫濾液細線時,要迅速,并要等濾液接近干時,再重復畫線,以防濾液擴散開使濾液線過寬,影響分離效果。
(3)將濾紙條插入層析液中時,要避免濾液細線直接觸及層析液。試管中的層析液高度不要接近或超過濾液細線所處的高度,可靈活把握層析液的用量。
教學設計1.創設情境 植物可以進行光合作用。植物體所有部位的細胞都可以進行光合作用嗎?綠色的葉片可以進行光合作用,而植物體的非綠色部位(如根)的細胞不能進行光合作用。
引出光合作用的必要條件之一──光合色素。2.提出問題 綠色的植物細胞中參與光合作用的色素有幾種?3.原理介紹 參見本實驗的實驗原理。
4.學生了解實驗步驟 學生分小組閱讀、討論實驗操作步驟,并提出他們所困惑的問題。教師組織學生討論問題并解決問題。
5.實驗操作過程 略6.觀察和分析結果 觀察濾紙條上色素帶的數量、顏色、排列順序。7.得出結論 使學生明確光合色素的種類。
8.引導學生填寫實驗報告 評價建議 本實驗可重點針對學生實驗操作的規范性、準確性,以及實驗結果的好壞做出評價。替代方案 實驗名稱:綠色植物光合色素的分離 實驗目的:1.嘗試用紙層析法分離綠色植物的光合色素。
2.探索綠色植物光合色素的種類。實驗原理:(同原實驗) 材料:新鮮的綠色葉片(如菠菜葉、朱槿葉等) 用具:吸水紙,定性濾紙,小燒杯,培養皿蓋,墊板,硬幣,量筒。
試劑:層析液 操作要點:1.制備濾紙條 取干燥的定性濾紙,剪成長6 cm左右、寬1 cm左右的濾紙條,將濾紙條的一端剪去兩角,并在距這一端1 cm處用鉛筆畫一條細橫線。2.獲取色素線 (1)取一片新鮮的綠色葉片。
(2)將墊板放在實驗臺上,把吸水紙鋪在墊板上,將制備好的濾紙條放在吸水紙上。(3)把葉片放在濾紙條上,用硬幣的側緣對準濾紙條上的鉛筆細線滾壓葉片,反復多次,直到在濾紙條上出現一條深綠色的色素線。
3.分離光合色素 將3 mL層析液倒入小燒杯,將濾紙條有色素線的一端向下,輕輕插入層析液中。不要讓色素線浸入層析液中,不要讓濾紙條貼在燒杯壁上。
用培養皿蓋蓋在燒杯上。4.觀察結果10 min左右取出濾紙條。
待其干燥后,觀察分離出的色素帶有幾條,分別呈什么顏色,并做好記錄。
4.綠葉中色素的提取和分離實驗
研磨液迅速倒入以及用棉塞是因為研磨要加入丙酮,丙酮很容易揮發,丙酮是用來溶解提取葉綠體中的色素,因為葉綠素能溶解在丙酮里。單層尼龍布是為了過濾充分吧,因為葉片的研磨有殘渣。
分離要用的主要試劑是層析液。層析液是一種脂溶性很強的有機溶劑。葉綠體中的色素在層析液中的溶解度不同:溶解度高的隨層析液在濾紙上擴散得快;溶解度低的隨層析液在濾紙上擴散得慢。
層析分離葉綠體中的色素:將紙條畫有濾液細線的一端置于燒杯中的層析液中,注意千萬不要將濾液細線浸沒在層析液中,否則會使色素溶解而導致試驗失敗。層析液是揮發性較強的有機溶劑,并且具有一定的毒性,所以在操作中要盡量用培養皿蓋住燒杯口。
觀察實驗結果:最后濾紙條上將分離出四條色素帶,顏色從上往下分別是橙黃色、黃色、藍綠色和黃綠色,四種色素分別是胡蘿卜素、葉黃素、葉綠素a和葉綠素b。
5.葉綠素提取實驗報告,有誰知道
實驗三:葉綠體色素提取分離與理化性質及含量測定 (一)實驗目的及意義 (二)實驗原理 (三)實驗步驟 (四)實驗報告 0/0/00 2 實驗目的和意義 因此,測定葉綠素含量便成為研究光合作用與氮代謝必不可少的手段,在作物育種、科學施肥、看葉診斷中有著廣泛的應用 綠色植物的光合作用是在葉綠體中的葉綠體色素中進行的,了解葉綠體色素的組成、性質及測定對于理解光合作用的本質很有幫助。
0/0/00 3 葉綠體在細胞中運動視頻 0/0/00 4 葉綠體在細胞中的分布與結構 0/0/00 5 類囊體膜的結構及功能 0/0/00 6 實驗原理 植物葉綠體色素是吸收太陽光能,進行光合作用的重要物質。它一般由葉綠素a、葉綠素b、胡蘿卜素和葉黃素組成。
這些色素都不溶于水,而溶于有機溶劑,故可用乙醇、丙酮等有機溶劑提取。 0/0/00 7 實驗原理 葉綠素是一種二羧酸——葉綠酸與甲醇和葉綠醇形成的復雜酯,故可與堿起皂化反應而生成醇(甲醇和葉綠醇)和葉綠酸的鹽,產生的鹽能溶于水中,可用此法將葉綠素與類胡蘿卜素分開。
色素分離的方法有多種,紙層析是最簡便的一種。當溶劑(有機推動劑)不斷從紙上流過時,由于混合物(葉綠素提取液)中各種成分在固定相(濾紙纖維素所吸附的水分)和流動相(有機推動劑)間具有不同的分配系數,所以移動速度不同,經過一定時間后,可將各種色素分開。
0/0/00 8 實驗原理 葉綠素中的鎂可以被氫離子所取代而成褐色的去鎂葉綠素。去鎂葉綠素遇銅則成為銅代葉綠素,銅代葉綠素很穩定,在光下不易破壞,故常用此法制作綠色多汁植物的浸漬標本。
葉綠素與類胡蘿卜素都具有光學活性,表現出一定的吸收光譜,可用分光光度計精確測定。葉綠素吸收光量子而轉變成激發態,激發態的葉綠素分子很不穩定,當它變回到基態時可發射出紅光量子,因而產生熒光。
葉綠素的化學性質很不穩定,容易受強光的破壞,特別是當葉綠素與蛋白質分離以后,破壞更快,而類胡蘿卜素則較穩定。 0/0/00 9 實驗步驟(1) 今欲測定葉綠體色素混合提取液中葉綠素a、b和類胡蘿卜素的含量,只需測定該提取液在三個特定波長下的吸光度D,并根據葉綠素a、b及類胡蘿卜素在該波長下的吸光系數即可求出其濃度。
Ca=12.7D663 –2.69 D645(3) Cb=22.9 D645 –4.68D663(4) Ck=4.7D440- 0.27Ca+b 根據朗伯一比爾定律,某有色溶液的吸光度D與其中溶液濃度C和液層厚度L成正比,即: D=KCL D:吸光度,即吸收光的量,C:溶液濃度, K:為比吸收系數(吸光系數), L:液層厚度,通常為1cm. 如果溶液中有數種吸光物質,則此混合液在某一波長下的總吸光度等于各組分在相應波長下吸光度的總和,這就是吸光度的加和性。 0/0/00 10 實驗材料和器材 器材:721型分光光度計、電子天平、量筒、研缽、剪刀、漏斗、濾紙、移液管(1mL)、試管及試管架、洗耳球、酒精燈等。
試劑:丙酮、80%丙酮、醋酸酮、5%鹽酸、碳酸鈣、石英砂等 實驗材料 鹵地菊葉片 0/0/00 11 實驗步驟(1) 分離:在大試管中加入推動劑,然后將濾紙固定于膠塞的小鉤上,插入試管中,使尖端浸入溶劑內(色點要高于葉面,濾紙條邊緣不可碰到試管壁),蓋緊膠塞,直立于陰暗處層析。 當推動劑前沿接近濾紙邊緣時,取出濾紙,風干,觀察色帶的分布。
葉綠素a為藍綠色,葉綠素b為黃綠色,葉黃素為黃色,胡蘿卜素為橙黃色。用鉛筆標出各種色素的位置和名稱。
1.葉綠體色素的提取 (1)取植物新鮮葉片1克,洗凈,擦干,去掉中脈剪碎,放人研缽中。 (2)研缽中加入少量石英砂及碳酸鈣粉,2-3 mL95%乙醇,研磨至糊狀,再加2-3 mL95%乙醇,過濾,即得色素提取液。
2.葉綠體色素的分離 點樣:取前端剪成三角形的濾紙條,用毛細管取葉綠素提取液,如圖點樣于“色點”處,注意每次所點溶液不可過多,點樣后晾干,再重復操作數次。 0/0/00 12 理化性質測定 2.氫和銅對葉綠素分子中鎂的取代作用 方法一;取兩支試管。
第一支試管加葉綠體色素提取液2mL,作為對照。第二支試管加葉綠體色素提取液2 mL,再加入稀鹽酸1滴,搖勻,觀察溶液顏色變化。
當溶液變竭后,再加入少量醋酸銅粉末,微微加熱,觀察記錄溶液顏色變化情況,并與對照試管相比較。解釋其顏色變化原因。
將上一個實驗中提取的葉綠體色素溶液適當稀釋后,進行以下實驗: 1.熒光現象的觀察。 取l支試管加入濃的葉綠體色素提取液,在直射光下觀察溶液的透射光與反射光顏色有何不同,可觀察到反射出暗紅色的熒光。
0/0/00 13 理化性質測定 2.氫和銅對葉綠素分子中鎂的取代作用 方法一;取兩支試管。第一支試管加葉綠體色素提取液2mL,作為對照。
第二支試管加葉綠體色素提取液2 mL,再加入稀鹽酸1滴,搖勻,觀察溶液顏色變化。當溶液變竭后,再加入少量醋酸銅粉末,微微加熱,觀察記錄溶液顏色變化情況,并與對照試管相比較。
解釋其顏色變化原因。 將上一個實驗中提取的葉綠體色素溶液適當稀釋后,進行以下實驗: 1.熒光現象的觀察。
取l支試管加入濃的葉綠體色素提取液,在直射光下觀察溶液的透射光。
6.在“綠葉中色素的提取和分離”實驗中,某同學按下表中的方法步驟進
(1)步驟②中無水乙醇的作用是提取綠葉中的色素.(2)按照上表中方法步驟進行實驗操作,該同學在步驟收集到的濾液呈淺綠色.(3)上述實驗操作中存在三處空格,請一一填寫分別是新鮮(含有色素多)、碳酸鈣(保護色素)、脫脂棉(色素容易被吸附在濾紙上,所以一般選用脫脂棉).(4)若將提取的天然葉綠素用作食品添加劑,根據你所學的葉綠素化學性質分析,天然葉綠素不能添加在酸性(酸性可以破壞色素)等食品中.(5)層析后濾紙條上的色素帶,自上而下依次為:橙黃色的胡蘿卜素;黃色的葉黃素;藍綠色的葉綠素a和黃綠色的葉綠素b.故答案為:(1)提取綠葉中的色素 (2)淺綠 (3)新鮮 碳酸鈣 脫脂棉 (4)酸性 (5)胡蘿卜素 葉黃素 葉綠素a 葉綠素b。
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